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品質保證 · 通蔚試劑

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產品中心

  • 人類內源性逆轉錄病毒W家族RT-PCR試劑盒

    規格:
    • 品牌 : 通蔚生物
    • 目錄號 : TW36016
    • 應用 : 僅供科研使用
    • 保存條件 : 低溫/避光保存
    • 貨期 : 現貨
    • 商品庫存:100
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人類內源性逆轉錄病毒W家族RT-PCR試劑盒
產品及特點:
人類內源性逆轉錄病毒(HERV)是存在于人類細胞 DNA 內并傳給子細胞的病毒,是幾百萬年前整合到人類基因組中的逆轉錄病毒的殘余物,約占了整個基因組的 8%。大部分 HERV 元件在進化過程中由于突變、缺失等的積累,已沒有編碼能力。但仍有少數由于正性選擇的壓力,完整的開放閱讀框被保留了下來。HERV 家族可以分為三大類,γ逆轉錄病毒相關元件、β逆轉錄病毒相關元件、泡沫逆轉錄病毒相關元件。其中 W 家族屬于γ逆轉錄病毒相關元件,分布于人類基因組的多條染色體上,這一類家族的活化主要與自身免疫性疾病以及神經系統疾病相關。本產品是根據 PCR 原理開發的人類內源性逆轉錄病毒 W 家族檢測的試劑盒。
1. 一站式,用戶不需要單獨準備每種成分,包括引物和對照。
2. 根據人類內源性逆轉錄病毒W家族的保守基因序列設計的引物,具有良好的特異性。
3. 靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應。
4. 使用一管式 RT-PCR 技術,RT 和 PCR 兩步在一個試管內完成,不需要中間轉移樣品,降低了操作誤差和可能的污染。
5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR。
6. 本產品只能用于科研,不能用于臨床。
規格及成分:

編號

成分

規格

試劑一

5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer

200 μL(橘黃蓋)

試劑二

MMLV-Taq Mix

75 μL(紅蓋)

試劑三

超純水

1 mL(亮黃蓋)

試劑四

人類內源性逆轉錄病毒W家族 RT-PCR 引物混合液

100 μL(白蓋)

試劑五

人類內源性逆轉錄病毒W家族 RT-PCR 陽性對照(1×10E8 /μL)

50 μL(黃蓋)

試劑六

使用手冊

1 份

注:為避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供專一的DNA 片段作為陽性對照。
運輸及保存:
低溫運輸,-20℃保存,保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分開放置,因為其容易污染其他成分,造成假陽性。
自備試劑:
樣品 RNA。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備:
1. 如果有 N 個樣品,必須設置 N+2 個提取,多出的一個是 PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?10μL 人類內源性逆轉錄病毒W家族 PCR陽性對照的 1000 倍稀釋液作為制備的陽性對照。可以用水作為制備的陰性對照。制備所得成為樣品 RNA。
2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA,本試劑盒跟市場上大多數病毒 RNA 提取試劑盒兼容??梢赃x購本公司的柱式病毒 RNAout。
二、設置RT- PCR 反應(20μL 體系):
3. 如果有 N+2 個樣品,則標記 N+4 個 PCR 管(額外增加的兩個管一個是RT-PCR 陽性對照,另一個是 RT-PCR 陰性對照)并按照下表在 PCR 管中加入下列成分:

成份

N+2 個

樣品管

RT-PCR

陰性對照

RT-PCR

陽性對照

5×雙酶一管式RT-PCR Buffer

4 μL

4 μL

4 μL

人類內源性逆轉錄病毒W家族RT-PCR 引物混合液

2 μL

2μL

2μL

N+2 個制備的 RNA 樣品

12.5μL

--

--

超純水

--

12.5μL

--

人類內源性逆轉錄病毒W家族RT-PCR 陽性對照的 1000倍稀釋液

--

--

12.5μL

MMLV-Taq Mix

1.5 μL

1.5 μL

1.5 μL

4.上機進行 RT-PCR,RT-PCR 反應參數為:

過程

溫度

時間

逆轉錄

42℃

30 min

預變性

95℃

5 min

PCR 反應35個循環

95℃

30 sec

58℃

30 sec

72℃

20 sec

最后延伸

72℃

7 min

三、電泳檢測:
5. 瓊脂糖電泳檢測擴增效果。如果陰性對照有擴增產物或陽性對照無擴增產物,則說明實驗失敗,需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有擴增產物、陽性對照必須有預期條帶出現,才有必要分析樣品的實驗結果,如果有預期片段大小的擴增產物則為陽性,如果無則為陰性。
四、特別提示:
本公司的所有產品,僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!
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