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托拉斯假單胞菌PCR試劑盒
產(chǎn)品及特點：
細菌性褐斑病的病原菌為托拉斯假單胞桿菌（Pseudomonas tolaasii），其產(chǎn)生的細胞外毒素－托斯毒素（tolaasin）可直接破壞平菇菌絲的細胞膜，平菇菌蓋表面產(chǎn)生黃褐色或深褐色的斑點，使染病子實體的商品價值大大降低，嚴(yán)重影響平菇生產(chǎn)的經(jīng)濟效益。因此，了解托拉斯假單胞桿菌致病力狀況，對生產(chǎn)中平菇品種的選擇和抗病育種均具有重要意義。本產(chǎn)品是根據(jù)PCR 原理開發(fā)的托拉斯假單胞菌檢測試劑盒，它具有下列特點：1. 即開即用，用戶只需要提供DNA模板。
2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增托拉斯假單胞菌，與其他病原沒有交叉反應(yīng)。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。
5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次，但只能用于科研。
規(guī)格及成分：
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編號 |
成分 |
規(guī)格 |
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試劑一 |
PCR MagicMix 3.0 |
1 mL（紅蓋） |
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試劑二 |
超純水 |
1 mL（亮黃色） |
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試劑三 |
托拉斯假單胞菌 PCR 引物混合液 |
100 μL（白蓋） |
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試劑四 |
托拉斯假單胞菌 PCR 陽性對照（1×10E8 /μL） |
50 μL（黃蓋） |
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試劑五 |
使用手冊 |
1 份 |
運輸及保存：
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其他試劑。自備試劑：
樣品 RNA。使用方法：
一、樣品 DNA 的制備：1. 用自選方法純化N+2個樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。可以選用本公司柱式病毒 DNAout。
2. 如果有N個樣品，則需要做N+2個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 托拉斯假單胞菌PCR 陽性對照的 1000 倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)(40μL 體系)：
3. 對N+2個樣品，在PCR時需要增加一個PCR陽性對照和一個PCR陰性對照，故需要設(shè)置N+4個反應(yīng)。在N+4個PCR管中分別加入下列成分：
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成份 |
N+2 個樣品管 |
PCR 陰性對照 |
PCR陽性對照 |
|
PCR Magic Mix 3.0 |
各 20μL |
20μL |
20μL |
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托拉斯假單胞菌PCR 引物混合液 |
各2μL |
2μL |
2μL |
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N+2個樣品DNA模板 |
各18μL |
-- |
-- |
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PCR 陰性對照（水） |
-- |
18μL |
-- |
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PCR 陽性對照（托拉斯假單胞菌PCR陽性對照1000倍稀釋液） |
-- |
-- |
18μL |
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過程 |
溫度 |
時間 |
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預(yù)變性 |
95℃ |
5 min |
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PCR 反應(yīng)35個循環(huán) |
95℃ |
30 sec |
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55℃ |
30 sec |
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72℃ |
40 sec |
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延伸 |
72℃ |
7 min |
