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免疫熒光三標(biāo)四色即利用抗原抗體特異性結(jié)合原理，在同一張切片上顯示三種目標(biāo)蛋白的分布和共定位情況。
原理介紹: 酪酰胺信號放大(TSA，Tyramide signal amplification)技術(shù)是一類利用辣根過氧化酶(HRP)對靶蛋白進(jìn)行標(biāo)記的酶學(xué)檢測方法，類似常規(guī)免疫組化的DAB顯色方法 ，TSA技術(shù)同樣采用HRP標(biāo)記的二抗，同樣有對應(yīng)的“顯色”步驟(HRP催化加入反應(yīng)體系的酪胺熒光素底物，產(chǎn)生活化熒光底物，活化底物可與抗原上的酪氨酸等殘基共價(jià)結(jié)合，使樣品上穩(wěn)定的共價(jià)結(jié)合酪胺熒光素。之后用熱修復(fù)法洗去非共價(jià)結(jié)合的一抗-二抗-HRP復(fù)合物，重復(fù)下一種一抗-hrp二抗來第二輪孵育，換另一種酪胺熒光素底物，如此往復(fù)就可實(shí)現(xiàn)多重標(biāo)記。
