ELISA實(shí)驗(yàn)原理及類型

將已知抗體或抗原結(jié)合在某種固相載體上，并保持其免疫活性。測(cè)定時(shí)將待檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗體或酶標(biāo)抗原按不同步驟與固相載體表面吸附的抗體或抗原發(fā)生反應(yīng)，用洗滌的方法分離抗原抗體復(fù)合物和游離物成分，然后加入底物顯色，進(jìn)行定性或定量測(cè)定。

ELISA可用于檢測(cè)抗體，也可用于檢測(cè)抗原。根據(jù)檢測(cè)目的和操作步驟的不同，通常有三種類型的檢測(cè)方法。
1．間接法 此法是檢測(cè)抗體最常用的方法。將已知抗原吸附于固相載體上，加入待測(cè)血清(抗體)與之結(jié)合，洗滌后，加酶標(biāo)抗體和底物進(jìn)行測(cè)定。其原理見圖一。

圖一 ELISA間接法示意圖

2．雙抗體夾心法 此法常用于檢測(cè)抗原。將已知抗體吸附于固相載體，加入待測(cè)標(biāo)本(含相應(yīng)抗原)與之結(jié)合，溫育后洗滌，加入酶標(biāo)抗體及底物溶液進(jìn)行測(cè)定。見圖二。

3．競(jìng)爭(zhēng)法 此法可用于抗原及半抗原的定量測(cè)定，也可用于測(cè)定抗體。以測(cè)定抗原為例，將特異性抗體吸附于固相載體上，加入待測(cè)抗原和一定量的已知酶標(biāo)抗原，使二者競(jìng)爭(zhēng)地與固相抗體結(jié)合，經(jīng)過(guò)洗滌分離，最后結(jié)合于固相的酶標(biāo)抗原與待測(cè)抗原含量呈負(fù)相關(guān)。見圖三。