Elisa技術(shù)成為現(xiàn)今實(shí)驗(yàn)室不可或缺一部分，它具有靈敏度高、操作簡(jiǎn)單和安全備受青睞。即使操作簡(jiǎn)單，但是ELISA屬于較為專業(yè)的技術(shù)，在操作中也難免會(huì)出錯(cuò)。上海通蔚結(jié)合多年實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)為大家總結(jié)在ELISA實(shí)驗(yàn)中常見問題，了解這些問題可以在實(shí)驗(yàn)中少走彎路，提高實(shí)驗(yàn)效率，尤其是對(duì)于新手。

  1、ELISA實(shí)驗(yàn)耗時(shí)多久？

  Elisa耗時(shí)多久沒有明確定義，往往和實(shí)驗(yàn)類型、所用試劑盒及操作方法有關(guān)。例如：雙抗體夾心法需3.5-4小時(shí)不等，而競(jìng)爭(zhēng)法則需要2-2.5小時(shí)不等。大家在選購試劑盒時(shí)候順便可以咨詢商家，了解試劑盒耗時(shí)情況。相關(guān)閱讀：《elisa試劑盒有類型》

  2、血清樣本應(yīng)如何處理？

  采集全血樣本后，迅速將其轉(zhuǎn)移到帶蓋或蓋子的試管中——這將防止在離心過程中傳染性顆粒蒸發(fā)和氣溶膠化。讓樣本在室溫下凝結(jié)90分鐘，以完全形成凝塊。不要讓樣本在4攝氏度下凝結(jié)，因?yàn)檫@可能會(huì)導(dǎo)致纖維蛋白形成。在室溫下凝結(jié)90分鐘后，在離心之前，用木制涂抹棒沿著試管內(nèi)壁滑動(dòng)，以破壞凝塊對(duì)試管壁的粘附。在室溫下以2000Xg的速度離心樣本15分鐘。（要將2000Xg轉(zhuǎn)換為rpm，請(qǐng)參閱特定離心機(jī)的操作手冊(cè)）。

  離心后，取出血清并將其放入聚丙烯微量離心管中。請(qǐng)勿將樣品儲(chǔ)存/運(yùn)輸在玻璃管中。在玻璃管上清楚地貼上識(shí)別信息標(biāo)簽。

  3、血漿樣本處理步驟是什么？

  采集全血樣本后，迅速將其轉(zhuǎn)移到帶有抗凝劑和蓋子的試管中——這將防止在離心過程中傳染性顆粒蒸發(fā)和氣溶膠化。倒置試管，使樣本與抗凝劑充分混合。在室溫下以2000Xg的速度離心樣本15分鐘。（要將2000Xg轉(zhuǎn)換為rpm，請(qǐng)參閱特定離心機(jī)的操作手冊(cè)）。

  離心后，取出血漿并將其放入聚丙烯微量離心管中。盡量小心，不要將紅細(xì)胞與血漿一起轉(zhuǎn)移。請(qǐng)勿將樣品儲(chǔ)存/運(yùn)輸在玻璃管中。在玻璃管上清楚地貼上識(shí)別信息標(biāo)簽。

  4、組織樣本應(yīng)如何處理？

  將組織勻漿放入PBS（不含洗滌劑或EDTA）中。使用機(jī)械勻漿器后，對(duì)勻漿進(jìn)行超聲處理60秒，以確保細(xì)胞破碎。離心組織勻漿以去除細(xì)胞碎片。

  離心后，取出組織勻漿上清液，放入聚丙烯微量離心管中。請(qǐng)勿將樣品儲(chǔ)存/運(yùn)輸在玻璃管中。在玻璃管上清晰地貼上識(shí)別信息標(biāo)簽。

  5、為何部分試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA法？

  競(jìng)爭(zhēng)法ELISA優(yōu)勢(shì)適用于檢測(cè)小分子抗原或半抗原。夾心法因缺乏足夠的位點(diǎn)進(jìn)行雙抗體夾心檢測(cè)，所以會(huì)選擇競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。其檢測(cè)原理為樣本抗原與固相抗原競(jìng)爭(zhēng)抗體結(jié)合位點(diǎn)，樣本抗原越多，固相抗體結(jié)合越少，顯色越淺，既顯色與樣本抗原濃度成反比。

  6、推薦哪款軟件來處理ELISA數(shù)據(jù)？

  數(shù)據(jù)分析用的較多是CurveExper，CurveExpert軟件是處理ELISA數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的優(yōu)選工具。相關(guān)閱讀：《elisa試劑盒如何定量蛋白濃度》

  上述是通蔚為初學(xué)者總結(jié)的一些ELISA常見的問題，這是我們?cè)谂c客戶溝通中反饋較多的問題，整理出來，希望對(duì)大家實(shí)驗(yàn)有所幫助！如果您對(duì)實(shí)驗(yàn)問題還有其它疑問，歡迎指出，我們會(huì)竭盡全力為您解答！祝您實(shí)驗(yàn)愉快！