通蔚生物土壤脂肪酶(Solid-Lipase，S-LPS)活性試劑盒測定原理

注 意 ：正式測定之前選擇 2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
LPS 又稱甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和單酯）。LPS 廣泛的存在于
各種生物中。
測定原理：
LPS 催化油酯水解成脂肪酸，利用銅皂法測定脂肪酸生成速率，即可計算 LPS 活性。
自備儀器和用品：
研缽、臺式離心機、震蕩混勻器、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液槍、甲
苯 80mL、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
標準品：液體 10 μL×1 瓶，10 μmol/mL 的標準溶液，4℃保存。臨用前加入 3.168 mL 甲苯，充分溶解。
樣本處理：
建議稱取約 0.1g 土樣，加入 1mL 試劑一進行冰浴勻漿，再用回旋式振蕩器振蕩提取 15min，4℃，4000g 離
心 10min，取上清待測。
S-LPS 測定操作：
1. 分光光度計/酶標儀預熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 710 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑一和試劑二置于 37℃水浴預熱 30min。
3. 在 1.5mL EP 管中依次加入下列試劑
37℃振蕩反應 5 min 后，靜置 5min，取 200μL 上層液加入微量石英比色皿/96 孔板，于 710nm 處測定吸光值。
注意：空白管和標準管只需測定一次。
S-LPS 活性計算公式：
活性單位定義：37℃中每克土樣每分鐘水解橄欖油生成 1μmol 脂肪酸為一個酶活單位。
S-LPS (μmol/min/g 土樣) = [C 標準品×(A 測定管-A 空白管)÷（A 標準管- A 空白管）]×V 反總÷（W×V 樣
÷V 樣總）÷T=16×[(A 測定管－A 空白管)÷（A 標準管- A 空白管）]÷W
C 標準品：10 μmol/mL；V 反總：反應總體積，0.8mL；V 樣：反應中加入樣本體積，0.05mL；V 樣總：
加入提取液體積，1mL； W：樣本質(zhì)量，g；T：催化反應時間，10 min。
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