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【通蔚生物】:麥芽糖含量測試盒測定原理介紹

發布時間:2024-03-29     發布作者:上海通蔚生物

通蔚生物麥芽糖含量測試盒測定原理介紹:
麥芽糖含量測試盒
測定意義:
麥芽糖是由兩個葡萄糖單位經由α-1,4 糖苷鍵連接而成的二糖,又稱麥芽二糖。麥芽糖是淀粉、糖原、糊精等大分子多糖類物質在β-淀粉酶催化下的主要水解產物,再經麥芽糖酶催化,則被水解成兩個葡萄糖分子。麥芽糖不僅參與了生物體內糖代謝,其在食品和醫藥工業等行業也著廣泛應用,是產品質量控制的重要指標之一。
測定原理:
麥芽糖酶將樣品中麥芽糖水解為葡萄糖; 葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并產生過氧化氫;過氧化物酶催化過氧化氫氧化 4-氨基安替比林偶聯酚,生成有色化合物,在 505 nm 有特征吸收峰。需自備的儀器和用品:
酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、96 孔板、研缽、冰、和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:液體 70mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1 瓶,4℃保存;臨用前加 6 mL 試劑一溶解后待用,用不完的試劑分裝后-20℃保存;試劑三:液體 10ml×1 瓶,4℃保存; 試劑四:液體 10ml×1 瓶,4℃保存; 麥芽糖提取:按照樣本質量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入1mL 試劑一),研磨成勻漿,95℃水浴 10 分鐘(蓋緊,防止水分散失),冷卻后,8000g,25℃離心 10min,取上清液備用。測定步驟:
1、 酶標儀預熱 30min 以上,調節波長至 505nm。
2、 混合試劑的配制:使用前將試劑三和試劑四 1:1 等體積混合,用多少配多少。
3、 測定管:取 200μL 上清,加入 100μL 試劑二,混勻,55℃反應 60 min,待測。對照管:200μL 上清,加入 100μL 試劑一,混勻,55℃反應 60 min,待測。
4、加樣表(在 96 孔板中加入下列試劑): 試劑(μL) 測定管 對照管
測定管待測液 40
對照管待測液 40
混合試劑 160 160
混勻,40℃保溫 30 min 后,于 505nm 波長處讀取吸光度。測定管和對照管吸光值分別記為A 測定和 A 對照。ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管設一個對照管。
麥芽糖含量計算:
標準條件下測定回歸方程為 y = 2.8944x + 0.0052;R2 = 0.9997;為標準品濃度(mg/mL),y
為吸光值差值。
麥芽糖(mg/g 鮮重)=(ΔA-0.0052) ÷2.8944×V 總÷W =0.3455×(ΔA-0.0052)÷W
V 總:加入提取液體積,1 mL;W:樣本質量,g
上海通蔚生物一直致力于為廣大高校、科研院所和企事業單位提供的科研麥芽糖含量測試盒試劑和完善的技術服務,滿足生物化學、分子生物學、細胞生物學、免疫學等生物科技實驗需求。
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