ELISA技術(shù)中抗原與抗體的反應(yīng)
ELISA是一種免疫測(cè)定。免疫測(cè)定(immunoassay, IA) 是應(yīng)用免疫學(xué)技術(shù)測(cè)定標(biāo)本的方法。在檢驗(yàn)中主要通過(guò)抗原抗體反應(yīng)檢測(cè)體液中的抗體或抗原性物質(zhì)。
ELISA技術(shù)中抗原與抗體的反應(yīng)
抗原抗體反應(yīng)
可逆性抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過(guò)程是一種動(dòng)態(tài)平衡，其反應(yīng)式為Ag+Ab-+Ag*Ab抗體的親和力(親和)是抗原抗體間的固有結(jié)合力，可以平衡常數(shù)<表示：K=[Ag-Ab]/[Ag][Ab]。AG-Ab的解離程度與K值有關(guān).高親和力抗體的抗原結(jié)合點(diǎn)與抗原的決定簇在空間構(gòu)型上非常適合，兩者結(jié)合牢固，不易解離.解離后的抗原或抗體均能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性，因此可用親和層析法來(lái)提純抗原或抗體.在抗血清中，特異性的IgG抗體僅占總IgG中的極小部分。用親和層析法提取的特異性抗體，稱為親和層折純抗體，應(yīng)用于免疫測(cè)定中可得到更好的效果.
免疫測(cè)定在檢驗(yàn)中的應(yīng)用
1、體液中的各種蛋白質(zhì)，包括含量極少的蛋白質(zhì)如甲胎蛋白等。
2、激素，包括小分子量的甾體激素等。
3、抗生素和藥物。
4、病原體抗原，HBsAg、HBeAg等。
5、另外，也可利用純化的抗原檢測(cè)標(biāo)本中的抗體，例如抗-HBs等。
ELISA技術(shù)中抗原與抗體的反應(yīng)如上所述，免疫測(cè)定是一種很敏感的測(cè)定方法，抗原抗體反應(yīng)后直接測(cè)定形成的沉淀或濁度，敏感度可達(dá)5~10μg/ml,但在檢驗(yàn)中，某些待測(cè)物在標(biāo)本中的含量遠(yuǎn)低于這一水平，因此要尋找增加敏感度的方法。標(biāo)記的免疫測(cè)定是將檢測(cè)試劑中的抗原或抗體用可微量測(cè)定的物質(zhì)加以標(biāo)記，通過(guò)測(cè)定標(biāo)記物來(lái)提高敏感度。在放射免疫測(cè)定和酶免疫測(cè)定中，標(biāo)記物分別為放射性核素和酶，最后用測(cè)定放射性和酶活力來(lái)計(jì)算待檢物的量，敏感度可比直接測(cè)定沉淀物提高數(shù)百至數(shù)千倍。在標(biāo)記免疫測(cè)定中，一-般加入過(guò)量的標(biāo)記試劑以保證與待測(cè)物徹底反應(yīng)。以標(biāo)記抗體(Ab※)檢測(cè)抗原(Ag)為例，反應(yīng)式如下: Ag+ Ab※→AgAb※+ Ab※。在反應(yīng)產(chǎn)物中有與Ag結(jié)合的Ab※和游離和Ab※，如不將兩者分離而測(cè)定標(biāo)記物，測(cè)得的結(jié)果將為兩者之和。因此，游離標(biāo)記物與結(jié)合標(biāo)記物的分離是標(biāo)記免疫測(cè)定中的重要步驟。可采用多種手段，固相載體是其中之一。如將抗原或抗上，而游離的標(biāo)記物留于溶液中。這樣可以通過(guò)洗滌將游離的Ab※除去，結(jié)合標(biāo)記物的測(cè)上，而游離的標(biāo)記物留于溶液中。這樣可以通過(guò)洗滌將游離的定可在固相上進(jìn)行。Ab※除去，結(jié)合標(biāo)記物的測(cè)
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