酶聯免疫吸附實驗（ELISA）是一種用途廣泛且應用廣泛的生化技術，用于檢測和定量特定分子，例如蛋白質、肽、抗體和小分子。不同類型ELISA—直接法、間接法、夾心法和競爭法提供了針對各種研究、診斷和臨床應用的獨特方法。接下來上海通蔚生物為大家介紹每種類型的ELISA及其獨特的優勢、注意事項和應用。

直接ELISA

在直接ELISA中，抗原直接固定在微孔板表面，接著加入針對該抗原的標記酶標抗體，該抗體直接與抗原結合。直接ELISA法相對簡單快捷，其靈敏度低于其它方法。

優點：

操作步驟簡單、直接

無需二抗，避免交互反應

缺點：靈敏度較低

抗體成本高

應用：直接ELISA可用于篩選生物樣本中的抗原，定量可直接與抗體結合而不受干擾的抗原，并由于其簡單性和快速的周轉時間而用于快速診斷測試。

間接ELISA

在間接ELISA中，抗原直接固定在微孔板表面，加入針對該抗原的未標記一抗，然后加入與一抗結合的標記二抗。間接ELISA法可以放大信號，提高靈敏度。

優點：放大信號

林敏度高

可以檢測多種抗原

缺點：步驟復雜

非特異性結合風險增加

應用：間接ELISA可以檢測和量化血清或其他生物液體中的抗體，篩選大量樣本的抗體反應（例如，在血清學調查中），并在疫苗開發和免疫反應研究中確定抗體滴度。

夾心ELISA

夾心ELISA法是將針對目標抗原的特異性捕獲抗體固定在微量滴定板上。加入含抗原的樣品，如果存在抗原，則該抗原會與捕獲抗體結合。然后，加入針對該抗原不同表位的、帶酶標記的特異性檢測抗體，與抗原形成“夾心”結構。之后直接加入底物，即可通過顯色進行檢測。”

優點：高特異性和靈敏性

不容易受到特異性結合的干擾

適用于檢測復雜生物樣本中的抗原

缺點：

需要兩種能夠識別抗原上不同表位的特異性抗體。

由于需要配對抗體，技術要求更高，且成本可能較高。

應用：夾心ELISA的應用示例包括量化復雜生物樣本（例如血清、組織裂解物）中的特定抗原、檢測疾病診斷中的生物標志物（例如檢測腫瘤標志物、細胞因子）以及監測研究和臨床環境中的蛋白質表達水平。

競爭ELISA

將特異性的捕獲抗體預先包被在微量滴定板上。然后，將含有未知量抗原的樣品與已知量的標記抗原（與酶偶聯）混合后，一同加入到孔中。樣品中的抗原和標記抗原會競爭與板上有限的捕獲抗體結合。樣品中的抗原越多，能結合到板上的標記抗原就越少，因此最終的顯色信號就越弱。信號強度與樣品抗原的濃度成反比。競爭性ELISA適用于定量小分子或檢測抑制劑。

優點：

適用于檢測小分子或抑制劑。

可以根據競爭性結合量化抗原濃度。

提供相對于標準曲線的分析物濃度的直接測量。

可以基于直接、間接或夾心ELISA

缺點：

通常比夾心法或間接ELISA靈敏度低。

需要仔細優化抗原和抗體濃度。

更容易受到檢測條件變化的影響而導致結果受到影響。

應用：競爭性ELISA的一些應用包括檢測和量化小分子或抑制劑（例如藥物、激素）、評估病毒學和疫苗研究中的抗體中和作用，以及篩查食品、環境樣本或藥品中的污染物或殘留物。