ELISA檢測抗體所標記的酶（通常是 HRP 或 AP）決定了 ELISA 實驗可用的檢測方法。最常用的三種檢測方法是比色法、熒光法和化學發光法，根據實驗所需的靈敏度、定量的動態范圍、信噪比等選擇檢測方法。

  比色測定

  ELISA實驗最常用的檢測方法是比色法。通常，辣根過氧化物酶 (HRP) 或堿性磷酸酶 (AP) 偶聯抗體用于與底物（例如TMB ）進行顯色反應。這是通過測量吸光度來檢測的，并通過創建校準曲線或比較樣品的顏色來量化。

  化學發光分析

  第二種檢測方法是利用過氧化物酶標記的檢測抗體進行化學發光反應。在此方法中，將基于魯米諾的增強劑溶液與底物一起添加以產生化學發光反應，并使用光度計進行檢測。當需要寬動態范圍時，使用化學發光檢測。

  熒光測定

  第三種檢測方法使用帶有熒光底物的過氧化物酶標記的檢測抗體。該方法可以產生更高的信號和更寬的動態范圍。然而，熒光底物的半衰期通常比比色底物短，并且染料的漂白可能是一個問題。

  使用黑色多孔板進行熒光測定，以盡量減少背景。用熒光計檢測從酶促反應獲得的熒光信號。

  如何確保ELISA實驗的獲得理想的結果

  起始材料是關鍵。為您的 ELISA 選擇合適的實驗室設備非常重要。就像微孔板設計這樣簡單的事情都會影響收集的數據。由于測量的是光作為反應終點，因此選擇透明板進行比色，選擇黑色板進行熒光檢測，選擇白色板進行發光 ELISA 檢測。

  例如，在測量熒光測定時，使用避免孔之間光散射的材料非常重要。使用專為熒光測定設計的板還可以避免塑料發出的熒光。科研人員應該意識到某些生物體液會顯示背景熒光；適當的稀釋步驟可以幫助防止這種干擾。

  孔內充分混合也是一個優先事項。考慮在您的實驗室設置中使用微孔板搖床或帶有集成搖床的讀板器。優化您的工作流程還可以創建良好的數據：通過防止分析物蒸發并確保正確移液來最大限度地減少邊緣效應，這意味著微孔板中的所有孔都能提供良好的無偏差結果。

  與所有實驗室方案一樣，關注測定設計并了解所研究的分析物是 ELISA 成功的關鍵。