酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（ELISA）是一種常見(jiàn)的免疫實(shí)驗(yàn)技術(shù)。科研工作者可以用它來(lái)檢測(cè)樣本中特定抗原或抗體。ELISA基本原理相對(duì)簡(jiǎn)單，但是整個(gè)實(shí)驗(yàn)涉及多個(gè)步驟，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。以下是ELISA實(shí)驗(yàn)步驟：

圖1 ELISA實(shí)驗(yàn)步驟（圖片來(lái)源網(wǎng)絡(luò)）

  1.樣本準(zhǔn)備。需要準(zhǔn)備好待檢測(cè)的樣本，這些樣本包括血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液等。樣本的收集和保存要符合實(shí)驗(yàn)的要求。相關(guān)閱讀：《酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)：ELISA樣本處理、收集和保存》

  2.加樣。將樣本和對(duì)照品加入到ELISA板指定的孔中。這一步確保加樣準(zhǔn)確性和一致性。

  3.孵育。加樣之后，需要將ELISA板放入指定的溫度（37度）下進(jìn)行孵育，讓抗原和抗體與固定的板上的抗體或抗原結(jié)合。

  4.洗滌。孵育之后，需要通過(guò)洗滌去除未結(jié)合的成分，以減少非特異性背景信號(hào)。這一步要確保洗滌的徹底性和一致性。

  5.酶標(biāo)抗體孵育。在洗滌之后，需要加入酶標(biāo)抗體（通常是辣根過(guò)氧化物酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的抗體），結(jié)合已結(jié)合的抗原和抗體。然后再次進(jìn)行孵育和洗滌操作。

  6.底物反應(yīng)。加入底物溶液，酶會(huì)催化底物發(fā)生反應(yīng)。顏色的深淺和樣本中目標(biāo)物質(zhì)的含量成正比。

  7.讀取結(jié)果。通過(guò)酶標(biāo)儀讀取ELISA板各孔的光密度（OD）值，計(jì)算出樣本目標(biāo)物質(zhì)含量。

  從上述步驟可以看得出ELISA操作步驟看似簡(jiǎn)單，但是每個(gè)步驟細(xì)節(jié)要嚴(yán)格的把控，任何一個(gè)環(huán)節(jié)的失敗都可能導(dǎo)致結(jié)果的偏差或錯(cuò)誤。對(duì)于初學(xué)者，通蔚建議有經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)人員指導(dǎo)下進(jìn)行。