ELISA，即酶聯(lián)免疫吸附實驗，其基本原理是將一定濃度的抗原或者抗體通過物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入待檢標(biāo)本，通過酶標(biāo)物顯色的深淺間接反映被檢抗原或者抗體的存在與否或者量的多少。ELISA技術(shù)作為免疫標(biāo)記技術(shù)（包含免疫熒光技術(shù)，免疫放射技術(shù)，免疫酶技術(shù)和免疫膠體金技術(shù)）中的一種，已廣泛應(yīng)用于科研和臨床實驗中，具有快速、定性或者定量甚至定位的特點。

  酶標(biāo)板作為ELISA實驗輔助的器材，起著舉足輕重的作用。正確使用酶標(biāo)板可以提高ELISA實驗最終結(jié)果。因此，選擇一款抗原/抗體吸附靈敏度高、對抗原/抗體吸附能力孔間差異小、批次間差異小的酶標(biāo)板產(chǎn)品，是實驗者獲得可靠、穩(wěn)定實驗結(jié)果的保障！如何選擇呢？今天，上海通蔚生物帶大家從酶標(biāo)板材質(zhì)、孔型和顏色等分類詳細(xì)介紹。

圖1 酶標(biāo)板

  酶標(biāo)板材質(zhì)

  酶標(biāo)板根據(jù)材質(zhì)劃分，可以分為聚苯乙烯（PS）、聚丙烯（PP）和其他材質(zhì)（如聚碳酸酯（PC）等，具有特殊的物理或化學(xué)性質(zhì)）。

  聚苯乙烯（PS）或許對大多數(shù)實驗小伙伴們比較了解，這種材質(zhì)是實驗使用比較廣泛的材質(zhì)。聚苯乙烯具有疏水性，但可以通過進(jìn)行表面處理或涂層來改變其性質(zhì)，以適應(yīng)不同應(yīng)用的不同要求，其特性使其最適合顯微成像和光學(xué)測量。

  聚苯乙烯由脂肪族碳鏈和懸垂的間歇性苯環(huán)組成。這提供了非常疏水的表面，這種類型的微孔板通常被稱為“中等結(jié)合”微孔板。關(guān)于中等結(jié)合，我下文會講到。

  可以通過表面處理（例如輻射）來增強(qiáng)結(jié)合能力，輻射會破壞一定數(shù)量的苯環(huán)，產(chǎn)生羧基(COOH)和羥基(OH)基團(tuán)。這些基團(tuán)的存在為親水相互作用提供了機(jī)會。以這種方式改性的微孔板通常稱為高結(jié)合。所得表面主要是疏水性的，具有間歇性羧基和羥基，能夠與生物分子上帶正電的基團(tuán)發(fā)生離子相互作用。

  聚丙烯(PP)是一種由丙烯單體制成的低密度、抗應(yīng)力熱塑性塑料。這種線性烴樹脂的化學(xué)式為(C3H6)n。它是由意大利科學(xué)家在20世紀(jì)50年代中期發(fā)現(xiàn)的，如今已成為繼聚乙烯之后產(chǎn)量第二大的塑料。

  聚丙烯是一種熱塑性材料，因此，它可以加熱到熔點，冷卻，然后再次加熱，而不會發(fā)生任何明顯的劣化。這種特性，加上它在高溫下液化而不是燃燒的能力，是使聚丙烯成為注塑等制造應(yīng)用的熱門選擇的兩個關(guān)鍵屬性。這種材料的其他一些特性包括：

  耐化學(xué)性：聚丙烯耐稀堿和酸，非常適合用作盛放清潔溶液等液體的容器。

  韌性：聚丙烯在有限的撓度范圍內(nèi)具有彈性，但它也可以被視為一種堅韌的材料，因為它在變形過程的早期經(jīng)歷塑性變形。韌性是指材料吸收能量和彎曲而不開裂的能力。

  絕緣：聚丙烯具有高電阻，使其成為電子元件的理想選擇。

  由于其耐化學(xué)性、耐細(xì)菌性和耐蒸汽滅菌性，聚丙烯還用于各種實驗設(shè)備，以下是聚丙烯（PP）比較適合的實驗類型：

  細(xì)胞培養(yǎng)：聚丙烯培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶等，因為其耐高溫、耐腐蝕、不易吸附細(xì)胞，可以用于細(xì)胞培養(yǎng)、培養(yǎng)基儲存等。

  離心管：聚丙烯離心管耐高溫，可在高轉(zhuǎn)速離心機(jī)中使用，適合樣品處理、離心分離等實驗。

  移液管：聚丙烯移液管耐化學(xué)腐蝕，可用于吸取各種液體，并且可以進(jìn)行高溫高壓消毒。

  PCR管：聚丙烯PCR管耐高溫，可以在PCR儀中使用，適合核酸擴(kuò)增實驗。

圖2 96 孔 PCR 微孔板

  其他：聚丙烯材質(zhì)還可用于制作其他實驗器材，例如，滴瓶、試劑瓶、培養(yǎng)皿等。

  需要注意的是，聚丙烯的透光率低，不適合光學(xué)檢測實驗，例如，比色法、熒光法ELISA等。上述為大家介紹比較常見的酶標(biāo)板材質(zhì)，其它的因為時間關(guān)系，暫時不介紹，不過非常喜歡和大家一起交流和分享提高實驗的效率。

  根據(jù)孔型分類

  1、孔數(shù)

  微孔板孔數(shù)分為96、48和384孔。實驗中比較常用的96孔，目前市面上大多數(shù)酶標(biāo)儀兼容96孔。

  2、孔底

  根據(jù)微孔板底部分為平底、U型底、V型底。平底折射率較低，適合在酶標(biāo)儀上檢測；U型底的酶標(biāo)板折射率較高，方便加樣、混勻等操作；V型底部的ELISA板可以準(zhǔn)確吸取樣本。

  3、顏色

  微孔板通常有四種顏色：透明、黑色、白色和灰色。根據(jù)所用的檢測模式，當(dāng)非常亮和暗的樣本相鄰時，顏色可能會影響信號與背景的比率和孔與孔之間的串?dāng)_。因此，顏色選擇不當(dāng)可能會對您的數(shù)據(jù)產(chǎn)生負(fù)面影響。

  吸光度測定需要使用透明（包括紫外線透明）微孔板，因為在此檢測模式下，光必須穿過樣品。

圖3 透明色微孔板

  黑色微孔板（由于碳的存在而變暗）會部分抑制樣品的信號。這是因為黑色會部分吸收來自樣品的光信號。因此，這些板非常適合熒光強(qiáng)度（包括FRET）和熒光偏振測定。這些通常是具有強(qiáng)信號產(chǎn)量的檢測模式，使用黑色有助于減少背景、自發(fā)熒光和孔間串?dāng)_，從而提供更好的信號空白比。

圖4 白色微孔板

  黑色微孔板通常不推薦用于發(fā)光、時間分辨熒光(TRF)和TR-FRET檢測，因為這些檢測模式通常具有相對較低的信號產(chǎn)量，并且會被黑色進(jìn)一步淬滅。建議使用含有二氧化鈦的白色微孔板進(jìn)行這些檢測。孔的白色部分反映了樣品信號，有助于最大化樣品信號。缺點是白色微孔板也會增加空白信號。然而，這在發(fā)光檢測中通常很低。在TRF中，延遲測量窗口消除了背景的影響。

圖5 黑色微孔板

  介于黑色和白色之間的中間解決方案是灰色微孔板。這些微孔板特別推薦用于AlphaScreen®和AlphaLISA®，因為它們可以減少串?dāng)_和背景，同時仍提供良好的信號。

  4、酶標(biāo)板結(jié)合力

  孔的表面特性起著重要作用。在這里，樣品和孔材料相互作用。通常，微孔板主要有三種類型：非結(jié)合或低結(jié)合、中結(jié)合和高結(jié)合。結(jié)合受材料物理特性的影響，可以通過應(yīng)用不同的涂層來改變。

  對于生化光譜和高通量篩選應(yīng)用，通常選擇無涂層的聚苯乙烯作為材料，并歸類為中等結(jié)合。

  非結(jié)合板可防止核酸、蛋白質(zhì)和肽與孔表面結(jié)合。此時，特定涂層可降低檢測背景并提高信噪比。

  高結(jié)合微孔板通常用于需要將分子固定在孔表面的檢測。其中最著名的用途之一是ELISA檢測。在此，特定的涂層和處理會引入一定數(shù)量的親水基團(tuán)，以促進(jìn)生物分子（例如抗體）的被動吸附。中結(jié)合微孔板和高結(jié)合微孔板通常在可用極性基團(tuán)的數(shù)量上有所不同。

  上述為大家介紹酶標(biāo)板的選擇技巧，除了選擇正確酶標(biāo)板之外，酶標(biāo)板使用也非常重要，具體可以參考說明書，了解酶標(biāo)板的注意事項。