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ELISA實驗常見樣本—細胞

發布時間:2024-01-31     發布作者:上海通蔚生物

  在科研實驗,ELISA進行檢測的樣本類型包括常見的血液(血清、血漿),組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養上清以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水等。今天由上海通蔚生物來介紹一下樣本細胞。


細胞


  細胞樣本根據目的物所在部位可選擇細胞裂解液細胞培養上清作為樣本。

  •   如果目的物所是分泌型,存在于細胞之外的話,即可選擇細胞培養上清作為樣本。
  •   胞培養上清處理方法:取細胞培養上清,1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測。

  目的物是存在于細胞內,則建議選擇細胞裂解液作為樣本。細胞裂解液處理方法如下:

  1.   貼壁細胞需要先用胰酶消化,離心收集細胞(懸浮細胞可直接離心收集);
  2.   將收集到的細胞用冷PBS洗3次;
  3.   物理方法裂解細胞(可先超聲破碎細胞,再反復凍融):
  4.   超聲破碎:取適量PBS重懸細胞,用一定功率的超聲波處理細胞懸液,使細胞急劇震蕩破裂;
  5.   反復凍融:將待破碎的細胞在-20℃以下冰凍,室溫融解,反復3次,使細胞溶脹破碎;
  6.   將標本于2-8度1500×g離心10分鐘,收集上清備用。

  細胞裂解液處理過程中,物理方法更優異于化學方法,化學方法會引入酸或堿,可能會對ELISA實驗產生影響。利用化學的細胞裂解液裂解細胞,如果去污劑成分會干擾抗原抗體反應影響檢測效果,推薦利用透析和超濾的方法除去去污劑成分。

  樣本保存事項:


  在處理樣本過程就是收集目標蛋白,由于這些目標蛋白容易變性,降解,該過程要盡量的溫和。贗本處理之后存儲也非常重要,不要反復凍融,處理后的樣本盡量密封保存,保存溫度在4°保存要小于一周,-20°保存要小于1個月,-80°保存要小于2個月。

  上述是上海通蔚為大家介紹ELISA實驗常見樣本細胞處理方法,希望對大家有所幫助!上海通蔚生物有ELISA試劑盒,靈敏度高,易用受廣大科研者青睞,歡迎選購。
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